茯砖茶是一种后发酵茶（属黑茶类） ， 是青藏高原、蒙古高原以及丝绸之路两侧的牧民日不可少的饮料 ， 并被称为神秘之茶 。 民间常将其作为一种治疗腹泻的偏方 ， 并有研究资料证明茯砖茶有很好的抗腹泻效果[1】 。 致泻的原因有多种 ， 主要腹泻有渗透性腹泻、分泌性腹泻、渗出性腹泻（炎症性腹泻）及肠道运动功能异常性腹泻等 ， 一般情况下细菌可能导致分泌性腹泻、渗出性腹泻 。 茶叶是一种纯天然饮料 ， 含有多种活性成分 ， 对微生物（包括细菌、病毒、丝状真菌等）具有广谱抗性 ， 对多种病原微生物的生长有明显抑制作用 。 近年来 ， 国内外的一些学者对茶叶具有抑菌作用的化学组分和机理有一定的研究2-5] ， 但有关茯砖茶的杀菌作用还鲜见报道 。 本研究选用常易引起动物腹泻的几种菌 ， 探讨不同年份茯砖茶的水提取物对其抑菌效果 ， 比较不同陈化程度的茯砖茶的抑菌活性 ， 为分析茯砖茶的药理功效做些基础研究 ， 对进一步扩大其销量具有十分重要的意义 。
一、材料与方法
1．材料
取湖南益阳茶厂于1996、2002和2009年3个不同年份生产的茯砖茶 ， 分别粉碎后过20目筛备用 。
试验菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、沙门氏杆菌（SaLnorzella）、溶血性链球菌（Streptococcus hemolyticus）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus su,btilis）、志贺氏菌（Shigella） ， 均由湖南农业大学食品科技学院微生物研究室提供 。
2．主要仪器与设备
R-100旋转浓缩仪（郑州长城科工贸有限公司） ， H-2050R离心机（长沙市八方科学仪器有限公司） ， HH数显恒
温水浴锅（金坛市金城国胜实验仪器厂） ， LS-B50L立式压力蒸汽灭菌器（上海医用核子仪器厂） ， SW-CJ-2D名牌之星净化工作台（苏州净化设备有限公司） ， ZD-85荣华气浴恒温振荡器（长沙八方科学仪器有限公司） ， 镊子、接种环、酒精灯、培养皿、无菌过滤头、铝质烘皿、规玻璃仪器、抽滤装置等 。
3．主要试剂
酒石酸钾钠、硫酸亚铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、三氯化铝等试剂均为分析纯 。
4．试验方法
(1)茯砖茶水提物的制备 。 茯砖茶水提物的制备参照文献[6] ， 将茯砖茶粉碎 ， 按茶水比1:15用沸水浸提茶叶30rmn ， 两层纱布过滤 ， 滤液经4500 rpm离心15min后浓缩 ， 制成相当于含茯砖茶原料l.Og/mL浓度的提取液 ， 放入高压蒸气灭菌锅中 ， 经121.3C、20min高压灭菌后 ， 冷却备用 。 (2)培养基和茯砖茶水提物的药敏纸片制备 。 牛肉膏汤、琼脂培养基及药敏纸片的制备均参考文献[7] 。
【不同年份茯砖茶水提取物的抑菌效果研究】(3)试验菌活化培养、活菌计数和供试菌液的制备按参照文献[ 8-9] 。
(4)药敏纸片法抑菌试验 。 按参照文献[10] 。
(5)最低抑菌浓度(MIC)的测定 。 按参照文献[11]略作优化 ， 将配置的固体培养基在121.30C、O.lMPa条件下灭菌20min ， 当灭菌培养基冷却至60 。 C左右时 ， 在无菌条件下准确量取不同体积的茯砖茶提取液加入固体培养基中 ， 配制成浓度lOOmg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、3.13mg/mL、1.56mg/mL和0.78mg/mL的茯砖茶水提取液浓度系列培养基 ， 每个浓度做3个重复 。 不加茯砖茶提取物液的培养基为阴性对照 。 冷却凝固后 ， 每平皿加入O.lmL的菌悬液 ， 涂匀 ， 将细菌置于37C下培养24h ， 观察生长情况以不长菌的最低提取物溶液浓度为该提取物的最低抑菌浓度 。
(6)茯砖茶茶多酚及黄酮类化合物含量测定参考文献[12] 。
二、结果与分析
1．六种细菌培养物菌落形成单位的测定
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