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【茶树阶段性返白现象的研究—RuBP羧化酶与蛋白酶的变化*】
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提要 安吉白茶(Camellia sinensis)是具有阶段性返白现象的温敏突变体 。 利用SDS-PAGE电泳分析了返白和复绿过程中各阶段叶片可溶性蛋白组分 ， 尤其是RuBP羧化酶大、小亚基的变化 ， 并利用同位素法测定了此过程中RuBP羧化酶活性的变化 。 利用内源基质法测定了蛋白酶活性的变化 ， 并分析了其变化与蛋白质源库代谢、叶绿素变化之间的相关性 。 发现安吉白茶在返白与复绿过程中叶片可溶性蛋白的主要变化是RuBP羧化酶大、小亚基含量上的差异 ， 这种差异与RuBP羧化酶活性的变化是相一致的 。 同时返白阶段蛋白酶活性较高 ， 可溶性蛋白含量降低 ， 是造成游离氨基酸总量明显积累的直接原因 。
关键词 安吉白茶；阶段性返白；温敏突变体；蛋白酶； RuBP羧化酶
Studies on the Stage Albescent Phenomenon in Tea
——the Changes of RuBPcase and Proteinase
Li Sufang Chen Ming Yu Fulian Cheng Hao
(Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008)
Abstract The variation of large and small subunits of RuBPcase from temperature-sensitive mutant of Anjibaicha (Camellia sinensis) during its stage albescent process was investigated as well as the changes of the enzyme activities. The relationship between the levels of the RuBPcase subunits and the activities of proteinase was also discussed. It was found the levels of both large and small subunits were low at the albescent stage and became normal after leaves recovered to green, which corresponded with the enzyme activity change. Meanwhile, the high activity of protease and the lowering of leaf soluble protein content. At the albescent stage were the direct reasons for the accumulation of free amino acids.
Key words Anjibaicha；Stage albescent mutation；Temperature sensitive mutant；Proteinase； RuBPcase
我们业已报道了温敏叶色突变体安吉白茶在返白过程中伴随着叶片色素含量的可逆性变化 ， 其茶多酚含量、氨基酸含量与组成等都有对应的相关变化〔1 ， 2〕 ， 尤其是返白阶段的氨基酸总量比对照品种高出许多 ， 使以此突变体为原料制作的成品茶滋味较为鲜爽；不仅如此 ， 在返白与复绿过程中还有叶绿体数量分布和叶绿体超微结构〔3〕的可逆性变化 。 但以安吉白茶无性系群体所产的种子进行繁殖的有性后代在白化性状上出现了分离 ， 大多数种子后代不再具有返白特征 ， 只有少量种子苗能保持其返白现象 。 本文主要探讨了在安吉白茶返白与复绿过程中 ， 叶片RuBP羧化酶和蛋白酶的变化情况 。
1 材料与方法
1.1 试验材料
种植在杭州中国农业科学院茶叶研究所苗圃和浙江省安吉县林科所白茶基地的无性系安吉白茶茶苗 。 并采用种植于本所苗圃的安吉白茶部分实生绿苗作为可溶性蛋白组分分析的对照材料 。
1.2 试验方法
1.2.1 叶片可溶性蛋白组分分析
1.2.1.1 叶片可溶性蛋白提取 白茶和对照样各500mg ， 液氮冻干 。 加3.5ml可溶性蛋白提取液(30mmol／L Tris-HCl ， pH 8.7；1mmol／L DTT；1mmol／L EDTA；5mmol／L MgCl2)、0.1g水不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及少量石英砂 ， 冰浴研磨 。 4℃ ， 8640r／min离心10min 。 取200μl ， 加1ml冷丙酮（内含10mmol／L巯基乙醇） ， 摇匀后置于-20℃冰箱1h ， 用TGL-16离心机10000r／min离心5 min ， 收集沉淀 ， 减压干燥 ， -20℃保存备用 。
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