PCR技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加 。
PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引胡物物 。
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五行袭碳糖(5'-3')的方向合成互补链 。
基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制 。
文章插图
扩展资料
PCR引物设计
PCR反应中有两条引物,即5′端引物和3′引物 。设计引物时以一条DNA单链为基准(常以信息链为基准),5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同;3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补 。
引物设计的基本原则
1、引物长度:15-30bp,常用为20bp左右 。
2、引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C 过多易出现非特异条带 。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照 。
3、引物内部不应出现互补序列 。
4、两个引物之间不应存在互补序列,尤其是避免3 ′端裤带液的互补重叠 。
5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%,引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列,否则易导致非特异性扩增 。
6、引物3‘端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,最佳选择是G和C 。
7、引物的5 ′端可以修饰 。如附加限制酶位点,引入突变位点,用生物素、荧光物质、地高辛标记,加入其它短序列,包括起始密码子、终止密码子等 。
参考资料:百度百科——PCR技术
【什么是PCR技术PCR的基本原理是什么】
推荐阅读
- 橄榄油为什么不能炸
- 欧洲人非洲人什么梗 啥意思
- 使命召唤腰射什么意思 腰射怎么练习
- lol饮用一瓶合剂是什么
- 欧洲是什么人种
- 莲雾里面的白色虫子是什么虫子
- 檀中血是人体哪一个位置
- 买s9还是s9+
- 原神角色获取方式 这款游戏有什么特点
- 逆水寒什么叫隔离 逆水寒隔离有什么用