1659年闰正月(清历闰三月)下旬，李定国于磨盘山(高黎贡山南段，在今腾冲、龙陵间，保山市西)羊肠小道设下三道伏击圈，每伏二千人，埋布地雷，准备尽歼上山清军 。清平西王吴三桂率领前军一万二千多人进入头伏、二伏阵地，即将钻入三伏 。关键时刻，突然跳出叛徒光禄寺卿卢桂生，将军机尽告吴三桂 。吴三桂大惊，赶忙收缩兵力并派出精甲搜杀、炮轰伏兵 。伏兵一下子损失三分之二，顿陷困境 。事发突然，李定国临危不乱，果断号令残存的二千伏兵发起攻击，并亲率仅有的预备队投入战斗 。磨盘山一役，明军在绝对劣势情况下歼灭八旗劲旅万余，斩杀三等男、都统、参将等清高级将领十余人，吴三桂败退 。遭此惨败，清军亦不再穷追，撤军东归(南征清军对外宣传“磨盘山大捷”，清廷事后核定为“败绩”，并惩处不少将领) 。李定国率部西走，追赶永历帝 。孰料永历帝已经先一步跑到缅甸避难去了 。
磨盘山一战，李定国以强弩之末主动设伏击敌，虽因出现意外而未能达成预期战果，但仍以寡击众，予敌以重创，杀出了军威，捍卫了自己明末第一名将的声誉，并阻遏了清军穷追猛打的攻势
一片孤忠的李定国，一边坚持在滇西抗清，一边同缅甸交涉请其交还永历帝 。缅王拒绝，李定国遂同战友白文选武力威逼缅甸交人，虽然数败缅军，却又不敢逼得太紧，怕永历帝遭不测 。
1661年，清廷接受镇守云南的平西王吴三桂的奏请，派遣内大臣爱星阿率领八旗军会同吴三桂攻缅索要永历帝 。清军进入滇西，白文选势蹙降清，李定国退往景线 。十二月初，清军入缅，命缅王交出明帝 。新缅王刚刚杀兄自立，根基不稳，不敢同清军抗衡，遂将永历帝父子母妻等骗送至吴三桂军营 。1662年四月，吴三桂绞杀永历帝父子 。
消息隔绝，李定国并不知道所发生的这一切，仍积极联络拥明亲明的土司，艰苦转战滇缅边境各地，不屈不挠地坚持抗清斗争 。五月中旬，丹心耿耿、孤忠映日的李定国复明之心不泯，明知不可为而为之，移师猛腊(今云南勐腊县)，积极扩军备战，联络友邻，准备克期出师滇桂 。这当口儿，永历帝遇难的噩耗传来，定国犹如天塌地陷一般，悲痛欲绝，同时亦感恢复无望 。定国缟素发哀，双目泪血，三天水米不进，形容枯槁 。
【李定国有哪些功绩 揭秘西南人们为何比较喜欢李定国】
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六月十一日是李定国四十二岁的生日，本是个喜庆的吉日，可定国却被痛苦折磨得忧愤成疾，疽(毒疮)发于背，遂大病不起 。心力交瘁的李定国自知将不久于人世，遂将儿子嗣兴与爱将靳统武唤到病榻前，殷殷叮嘱道：“宁可死于荒郊野外，也不许降清!”六月二十七日夜间，南明招讨大元帅、晋王李定国呕血数升，满怀着壮志未酬的终天之恨病逝于猛腊军中 。
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