[目的]为建立油茶RAPD分析的最佳反应体系 。 [方法]分别用改良SDS法和CTAB法从12个油茶品种的新鲜幼叶中提取基因组DNA 。 通过测定OD260和OD280来比较两种方法提取DNA的纯度 。 建立油茶的RAPD反应程序 , 通过优化反应条件获得油茶RAPD分析的最佳反应体系 。 [结果]CTAB法提取的油茶基因组DNA纯度高于SDS法 。 油茶RAPD分析的最佳反应体系为:1.0UTaqDNA聚合酶、1.5mmol/LMgCl2、200p.mol/LdNTP、10pmol/L随机引物、20ngDNA模板、2μl10×PCR buffer , 加重蒸水至20出 。 油茶的RAPD反应程序为:95℃预变性3min;94℃变性1min , 40℃退火1min , 72℃延伸2min , 40循环;72℃延伸7min 。 [结论]该研究所用DNA纯度较高 , 反应条件控制严格 , 试验中扩增稳定性较好 , 是适合油茶RAPD分析的最佳反应体系 。 【油茶DNA提取及RAPD分析最佳反应体系的建立】完成机构:南昌理工学院生环系,江西南昌330013
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