通过RT-PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶(TCS)cDNA编码区全序列 ， 并将其克隆到表达载体pET32a(+)中 ， 得到重组质粒pET-TCS ， 在表达宿主菌B121trxB(DE3)中高效表达 ， 产生相对分子质量约为62000的融合蛋白 。 该融合蛋白包括112个氨基酸残基的硫氧还原蛋白及370个氨基酸残基的茶树TCS蛋白 。 实验结果表明 ， 随着诱导时间的延长 ， 表达的融合蛋白产量逐渐增加 ， 表达蛋白总量最高可达到菌体总蛋白的39．14％；在15、25和37℃ 3个不同的诱导温度下 ， 均能诱导产生融合蛋白 ， 而且产生的总量及其可溶性部分所占比例均随诱导温度升高而增加；在菌体的各个部位中 ， 融合蛋白主要在细胞质中以可溶的形式进行表达 ， 有少量在外周质中表达或以包涵体形式在细胞质中表达 。 另外 ， 体外酶促反应表明 ， 表达的融合蛋白能催化可可碱甲基化生成咖啡碱 ， 具有正常的生物学活性 。 【茶树咖啡碱合酶cDNA在大肠杆菌中的表达】完成机构：[1]安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室 ， 安徽合肥230036 [2]安徽省教育学院 ， 安徽合肥230061
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