报道了国内第一个茶树cDNA文库的构建及其EST测序成功率分析 。 以Trizol一步法从龙井43春茶新梢中提取总RNA , 分离纯化富含Poly(A)的mRNA , LD-PCR反转录合成双链cDNA , 以入TripEX2为载体 , 构建了龙井43新梢cDNA文库 。 以XL1-Blue为受体菌测定原始文库的滴度为6.8×l0^5 pfu/ml , 总克隆数为3.5×l0^5个 , 重组率为98.05% , 扩增后文库总滴度为7.2×l0^9pfu/ml 。 对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定 , 表明插入片段大多分布在0.5.2.0kb之间 , 绝大部分在1.0.1.5kb左右 。 文库质量鉴定结果表明 。 构建的茶树新梢cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段 。 对4320个克隆的序列测定表明 , 获得有用序列2963个 , 测序成功率为68.5% , 剔除短序列后 。 首批共获得1687个茶树ESTs 。 【茶树新梢cDNA文库的构建和ESTs测序成功率初步分析】完成机构:[1]中国农业科学院茶叶研究所 , 浙江杭州3lO008 [2]中国农业科学院研究生院 , 北京lO008l [3]浙江大学分析测试中心生物大分子研究室 , 浙江杭州3l0029
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