一、准备工作
准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行 。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试 。
二、取材
在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材 。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程 。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养 。
理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养 。
取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存 。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质 。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理 。
三、培养
将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养 。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基 。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基 。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态 。
正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查 。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走 。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期 。
细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养 。每传代一次称为“一代” 。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去 。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性 。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料 。
四、冻存及复苏
为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存 。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中 。
在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的 。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解 。然后将细胞转入培养器皿中进行培养 。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响 。
文章插图
扩展资料：
进入细胞间开始细胞培养时，注意事项：
①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液 。
②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧 。
③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充 。
④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置 。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松 。
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